如何保存血清？

如何保存血清？

1. 血清应该在 -20℃保存，如一次无法用完一瓶，应该无菌分装，再冻冻保存。

如何解冻才不会使血清的质量受损？

1. 将血清首先置于 2-8℃冰箱中 12-24小时使之缓慢部分溶解，然后再放在室温下使之全溶。注意：溶解过程中要每隔一段时间缓慢的摇动血清使之混匀。

什么是热灭活，有必要作热灭活吗？

1. 热灭活是指以 56℃， 30分钟水浴处理已经解冻的血清，使血清中的补体灭活。激活的补体参与溶解细胞、刺激平滑肌收缩、刺激细胞和血小板释放组胺以及激活淋细胞和巨噬细胞。研究人员用多个批号的血清作过补体结合试验，结果显示，即使是未稀释的血清，也不会使红细胞溶解；另一方面，细胞生长实验显示，多数细胞在使用热灭活血清培养时生长速率降低，原因是高温处理影响了血清的质量。另外，经过灭活的血清，颗粒状沉淀物会显著增加。

建议：若非必须，不要对血清进行热灭活。不但可以节省时间，而且确保血清的质量。

血清中可能出现的沉淀物是什么？

基于 HyClone的经验以及多年的试验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：

1. 纤维蛋白：它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
2. 磷酸钙：它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
3. 胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质：它们也是血清中出现沉淀物的常见原因。

血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？

1. 细胞生长：我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。
2.       ◆“GIBCO 的胎牛血清没有预老化,如果存放在2-8℃，血清中的各种蛋白或酯类有可能会凝聚析出,出现沉淀或混浊. 这种现象不会影响血清对对细胞的促生长作用.我们建议把血清存放在–20℃，并避免反复冻融。《Invitrogen的网站》
3.      ◆“在熔化过程中混浊多絮状沉淀，这中现象对多数血清来说是正常的，并不影响其使用质量”。《Sigma胎牛血清说明书》
4. 过滤：如果血清中出现淀物，血清将很难过滤。一般说来，因为在血清生产时最后已经经过100nm或者 40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此 HyClone不推荐再过滤用于细胞培养的血清。在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。
5. 污染：磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。

是否可以控制血清中的沉淀物？

1. 在血清中沉淀物往往比较难预测和控制，但幸运的是这些沉淀不会影响血清的质量。
2. 血清内形成沉淀的原因很多，但是至今也没有搞清楚全部的原因。尽管HyClone 在血清生产上有超过35年的经验，但仍无法准确预测沉淀是否会出现以及出现的程度。

如何避免血清中沉淀物的出现？

1. 首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：
   1. 热灭活血清
   2. 37℃下培养血清
   3. 反复冻融
   4. γ射线焷射
   5. 2-8℃。
   6. 在室温下放置时间过长

如何去除血清中的沉淀？

1. 如想去除这些絮状沉淀物，可将血清分装到无菌离心管中，以400g 离心，上清液即可直接加入到培养基内一起过滤。注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。